代謝表型試驗(yàn)該如何操作？一起來看下

　　參與藥物代謝的CYP450酶主要為CYP1、CYP2和CYP3三個(gè)家族，共有7種重要的亞型，分別為CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4。如選用特異的選擇性抑制劑抑制不同亞型的酶的活性，便可研究藥物的酶代謝表型。

　　根據(jù)微粒體種屬的不同，可根據(jù)實(shí)際需求選擇人肝微粒體、恒河猴肝微粒體、比格犬肝微粒體、大鼠肝微粒體和小鼠肝微粒體中的一種。需于-70℃冰箱冷凍保存，切記避免反復(fù)凍融。代謝表型試驗(yàn)具體操作如下：
 

　　1、試驗(yàn)組：

　　（1）冰浴融化試劑盒各組分，置于冰上待用；

　　（2）除微粒體外，將孵育體系其它各組分按照配比混合并吹吸混勻，于37℃預(yù)孵育5min；

　　（3）將以上混合液195μL/管分裝至1.5mL離心管中，于37℃水浴中保溫，5μL/反應(yīng)加入肝微粒體，吹吸3次混勻于37℃水浴條件下啟動(dòng)代謝反應(yīng)，使用秒表計(jì)時(shí)；

　　（4）于設(shè)定孵育時(shí)間點(diǎn)，向孵育體系中加入200μL預(yù)冷的乙腈終止反應(yīng)（預(yù)冷乙腈：孵育體系體積=1:1）。

　　2、對照組：

　　（1）加陽性底物組：反應(yīng)體系中不加選擇性抑制劑，并將受試物換為陽性底物，其它組分加入量不變，缺少體積用0.1MPBS緩沖液補(bǔ)齊；

　　（2）無抑制劑組：反應(yīng)體系中不加選擇性抑制劑，其它組分加入量不變，缺少體積用0.1MPBS緩沖液補(bǔ)齊；

　　（3）無A液、B液組：反應(yīng)體系中不加A液和B液，其它組分加入量不變，缺少體積用0.1MPBS緩沖液補(bǔ)齊。

　　代謝表型試驗(yàn)注意事項(xiàng)：

　　1、試驗(yàn)開始前，請自行準(zhǔn)備1.5mL離心管、不同規(guī)格槍頭、乙腈、37℃水浴鍋等。

　　2、僅供科研使用，不能用于人體及動(dòng)物的治療或臨床診斷。

　　3、使用前，需于冰浴條件下解凍并混合均勻。

　　4、于-70℃冰箱冷凍保存，切勿反復(fù)凍融。

　　5、在使用過程中，也可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整各組分的加入量。