彗星試驗原理及注意事項

體內堿性彗星試驗在化合物遺傳毒性評價中的應用日益廣泛。ICH S2(R1)已將肝臟彗星試驗列為第2個組織/終點的體內試驗；體內哺乳動物堿性彗星試驗的指導原則（TG489）也已頒布。體內堿性彗星實驗能夠檢測DNA鏈斷裂、堿性不穩定位點、不完整切除修復引起的DNA鏈的斷裂，能夠制成合適細胞懸液的組織DNA損傷。與其他試驗相比其檢測的是單細胞水平的DNA損傷，因此該試驗敏感性較高，操作簡單，經濟省時。

實驗原理

彗星實驗（comet assay）也稱單細胞凝膠電泳試驗（single cell gel electrophoresis.SCGE）,是一種有效評估DNA損傷的方法。其原理是器官或組織經處理（如輻射、重金屬等）后，細胞中的DNA發生單鏈或雙鏈斷裂，經細胞及其核膜裂解后，DNA解旋，在電場作用下，DNA 斷片遷移出細胞核，形成彗星狀的電泳圖譜。正常細胞的大分子DNA在電場作用下遷移距離較短，DNA仍保留在細胞核的范圍，形成圓形或輕微拖尾的圖譜。根據電泳緩沖液的pH值不同，可分為中性彗星實驗（pH=8.4）和堿性彗星實驗（pH＞13）。中性彗星實驗主要用于檢測DNA雙鏈的斷裂損傷，堿性彗星實驗具有更高的靈敏性，可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷。

需要注意的是，試驗過程中的個方面，包括樣品準備、電泳條件、視覺分析參數(如染色強度、顯微鏡光強度以及使用顯微鏡濾鏡和相機動態和環境條件(如背景照明)已經被研究，可能影響DNA遷移。

堿性彗星實驗指導原則

TG489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay，2016，OECD Guideline for the Testing of Chemicals